离心机预冷4度操作规程图

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1、提取RNA时，以下步骤需注意： 4°C预冷离心机 2. 将组织或细胞裂解液转移到5毫升无RNA酶EP管中。置冰上，静置5分钟。3. 每管加入200ul氯仿，充分混合后冰上静置10分钟，使核蛋白复合物完全解离。4. 在4°C下以13000 rpm离心15分钟。期间，取一新EP管，加入500ul异丙醇，冰上预冷。5. 。

2、4. 加入蛋白酶K：加入100ul-150ul的蛋白酶K。5. 振荡和沉淀蛋白：在42℃ 100rpm下振荡5-2.5小时，每隔20分钟摇动离心管，然后加入2.4ml 2M Kcl，摇匀。6. 冰浴离心：冰浴1小时以上，确保充分沉淀。7. 离心去沉淀：使用预冷的离心机，20000 rpm 4℃离心30min。8. RNA沉淀：将离心后的。

3、基质胶解冻全程保持在4℃，移液枪头需预冷。铺胶时避免气泡产生，必要时离心以去除气泡。在凝胶形成期间避免摇晃平板，确保凝胶表面平整。接种细胞时，确保细胞活率高于95%。细胞密度影响血管形成的质量，需提前进行预实验。样本制备可与细胞悬液一起进行，以提高实验结果的准确性。六、参考文献 文献引用了。

4、蛋白样品提取：试剂：RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂 （1）取出含有细胞的6孔板，置于冰上进行操作 （2）吸出培养液，加入1ml预冷的PBS清洗一遍，加入PBS时务必沿着板壁注入，避免触碰到孔板底部导致细胞脱落。（3）吸出PBS，再次加入1mlPBS清洗 （4）用细胞刮轻柔的刮下细胞，将刮下来的细胞连同PBS一。

5、弃去上清,沉淀用适量的 Buffer B重悬,冰上孵育2hr后分装至EP管, Eppendorf台式离心机10000rpm,4℃离心30min。4)收集所得上清液即为膜组份。Buffer A:0.32M 蔗糖,5mM Tris-HCl(PH 7.5),120mM KCl,1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。冰上预冷。

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1、如果时间久了还是无法吹干，则可以放在50度烘箱中烘5分钟]9. 用200ul 70%冰预冷的乙醇清洗管壁和沉淀，DNA在70%乙醇中不溶，30%水的目的是溶解盐，防止干扰后续的酶切或其它操作；[反复吸起，先吸管壁，再轻轻吹打沉淀使之悬起均匀，这一步会有点损失，但是关系不大]；4度12000rpm离心5min；。

2、器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，5ml 微量离心管，双面离心管架，台式离心机，干式恒温气浴。试剂T 载体，T4 DNA 连接酶，连接酶缓冲液，无菌dd Water操作步骤PCR产物与T载体直接连接：（1） 事先将干式恒温仪（或冰盒里的水）温度设定在14~16°C。（2） 取4个灭菌的200ul微量离心。

3、取新鲜组织称重，用眼科手术刀将组织剪成小块放入试管中。2.加入动物蛋白裂解缓冲液，并转移到匀浆器中3.在冰浴条件下用匀浆器低速匀浆至组织完全裂解4.裂解液于预冷的离心机中以12000rmp离心13分钟，上清液立即转移入新的离心管中保存。温馨提示：若短时间不用，可置于4℃保存。较长时间不用，可。

4、(整个操作尽量在冰上进行。)6、 于4℃下12000rpm离心5min。(提前开离心机预冷)7、 将离心后的上清分装转移倒0.5min的离心管中放于-20℃保存。(个人感觉上述方法可操作性有待加强,细胞中蛋白本来就很少,一瓶50ml的细胞有时按照实验要求只能加100-200μ的裂解液,按照上述操作,直接用200μ裂解液进行裂解,根本就。

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